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Revista Científica Zambos
ISSN: 3028-8843
Vol. 5 - Núm. 1 / Enero – Abril 2026
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Mucílago de cacao como agente antifúngico in vitro frente a
Moniliophthora roreri
Cocoa mucilage as an in vitro antifungal agent against
Moniliophthora roreri
Ruperty-Parraga, Jackson Emilio
1
Ponce-Arévalo, Lady Diana
2
https://orcid.org/0009-0000-7021-2381
https://orcid.org/0009-0009-2920-4553
jackson.ruperty2016@uteq.edu.ec
lady.ponce2018@uteq.edu.ec
Ecuador, Quevedo, Universidad Técnica Estatal de
Quevedo.
Ecuador, Quevedo, Universidad Técnica Estatal de
Quevedo.
Rodríguez-Rivera, Roger Steven
3
Reasco-Tigua, Emily Dayana
4
https://orcid.org/0009-0007-3547-9268
https://orcid.org/0009-0000-8666-653
roger.rodriguez2017@uteq.edu.ec
emily.reasco2015@uteq.edu.ec
Ecuador, Quevedo, Universidad Técnica Estatal de
Quevedo.
Ecuador, Quevedo, Universidad Técnica Estatal de
Quevedo.
Manrique-Piedra, Kerly Xiomara
5
https://orcid.org/0000-0002-0610-5757
kerly.manrique2017@uteq.edu.ec
Ecuador, Quevedo, Universidad Técnica Estatal de
Quevedo.
Autor de correspondencia
1
DOI / URL: https://doi.org/10.69484/rcz/v5/n1/166
Resumen: Se evaluó el efecto antifúngico in vitro del
mucílago de cacao (Theobroma cacao L.) sobre
Moniliophthora roreri, con el propósito de definir
condiciones de fermentación y concentración con
mayor eficacia. En laboratorio se aplicó un diseño
completamente al azar con arreglo factorial,
considerando fermentación de 5, 10 y 15 días y
concentraciones de 10, 7,5, 5 y 2,5 por ciento, además
de un control. La actividad se estimó mediante
crecimiento micelial y cambios en la integridad de
membrana, usando conductividad eléctrica y
absorbancia a 256 nanómetros. El mucílago
fermentado 10 y 15 días redujo el crecimiento fúngico
y aumentó la permeabilidad celular frente a 5 días, y
las concentraciones de 10 y 7,5 por ciento mostraron la
mayor respuesta. Los hallazgos sugieren que la
fermentación potencia la bioactividad del mucílago y,
sin exagerar su alcance, respaldan su uso potencial
como alternativa sostenible para el manejo de la
moniliasis del cacao en sistemas productivos locales
cacaoteros.
Palabras clave: permeabilidad, biocontrol,
fitopatógeno.
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Abstract:
The in vitro antifungal effect of cocoa mucilage (Theobroma cacao L.) on
Moniliophthora roreri was evaluated in order to define the most effective fermentation
conditions and concentrations. A completely randomized design with a factorial
arrangement was applied in the laboratory, considering fermentation of 5, 10, and 15
days and concentrations of 10, 7.5, 5, and 2.5 percent, in addition to a control. Activity
was estimated by mycelial growth and changes in membrane integrity, using electrical
conductivity and absorbance at 256 nanometers. Mucilage fermented for 10 and 15
days reduced fungal growth and increased cell permeability compared to 5 days, and
concentrations of 10 and 7.5 percent showed the greatest response. The findings
suggest that fermentation enhances the bioactivity of mucilage and, without
exaggerating its scope, support its potential use as a sustainable alternative for the
management of cocoa moniliasis in local cocoa production systems.
Keywords: permeability, biocontrol, phytopathogen.
1. Introducción
El cacao (Theobroma cacao L.) se considera un rubro estratégico para economías
tropicales por su aporte a la seguridad económica rural, la generación de empleo y la
sostenibilidad de cadenas agroalimentarias vinculadas a mercados internacionales
(Beg et al., 2017; Da Silva et al., 2022). En este contexto, la viabilidad del sistema
productivo se condiciona por factores agronómicos y ambientales que definen el
rendimiento y la estabilidad del cultivo, especialmente bajo escenarios de
intensificación y presión sanitaria (Da Silva et al., 2022).
Entre las principales limitantes fitosanitarias del cacao destaca la moniliasis,
enfermedad asociada a Moniliophthora roreri, cuyo manejo convencional suele
apoyarse en intervenciones químicas y estrategias integradas que combinan
alternativas biológicas y químicas, dependiendo del nivel de presión y del tejido
susceptible (Bateman et al., 2005). Sin embargo, la sostenibilidad del control químico
se cuestiona por el impacto ambiental y sanitario derivado del uso intensivo de
plaguicidas, con evidencia de riesgos por contaminación, persistencia y efectos sobre
organismos no objetivo, lo que obliga a replantear estrategias compatibles con
enfoques de desarrollo sostenible (Maggi et al., 2020; Sharma et al., 2020; Tudi et al.,
2021; Nurika et al., 2022).
En línea con ese desafío, los subproductos del propio sistema cacaotero se exploran
como fuentes funcionales para bioproductos. El mucílago de cacao se describe como
una matriz con potencial bioactivo para formulaciones ecológicas, particularmente
cuando se combina con ácidos débiles en propuestas bioantimicrobianas, lo que
respalda su interés como alternativa de menor impacto (Moreno et al., 2021). Además,
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se reconoce que la fermentación puede modificar la bioactividad de matrices ricas en
polifenoles y otros metabolitos, alterando su perfil químico y, con ello, su potencial
funcional (Yang et al., 2023). En el caso específico del cacao, la dinámica fermentativa
se asocia a cambios que inciden sobre atributos de calidad y composición, lo que
refuerza la plausibilidad de un efecto dependiente del tiempo de fermentación sobre
la actividad biológica (Calvo et al., 2021). Bajo este marco, también se ha reportado
el potencial del mucílago como agente de control biológico contra Moniliophthora en
sistemas de cultivo de cacao, lo que sustenta la pertinencia de evaluar su eficacia bajo
condiciones controladas (Gutiérrez et al., 2021).
En función de lo anterior, el objetivo principal del presente estudio es evaluar el efecto
antifúngico in vitro del mucílago de cacao sobre Moniliophthora roreri, considerando
el tiempo de fermentación y la concentración del mucílago como factores
determinantes de su actividad biológica.
2. Metodología
La investigación se realizó en el laboratorio de bromatología del campus La María de
la Universidad Técnica Estatal de Quevedo, ubicado en el km 7 ½ de la vía Quevedo–
El Empalme, recinto San Felipe, cantón Mocache, provincia de Los Ríos, Ecuador (1°
3’ 18’’ S; 79° 25’ 24’’ O; 77,60 m s. n. m.), en una zona de clima tropical húmedo con
temperatura media anual de 25,4 °C y precipitación media anual de 3029,30 mm. El
estudio fue de carácter experimental bajo condiciones de laboratorio y se estructuró
mediante un diseño completamente al azar con arreglo factorial A×B, donde el factor
A correspondió al tiempo de fermentación del mucílago (5, 10 y 15 días) y el factor B
a la concentración (10 %, 7,5 %, 5 %, 2,5 % y control), conformándose 15 tratamientos
con 3 repeticiones cada uno.
Las mazorcas de cacao se recolectaron manualmente en madurez fisiológica y se
trasladaron al laboratorio para extraer las semillas recubiertas de mucílago. El
mucílago se obtuvo por decantación gravitacional en un recipiente de vidrio con orificio
basal, recolectándose conforme goteó durante 3 días. Posteriormente, el mucílago se
fermentó en envases de vidrio estériles por 5, 10 y 15 días y, al finalizar cada periodo,
se filtró mediante un filtro de 45 μm para retirar impurezas y emplearse en los ensayos.
La cepa de Moniliophthora roreri se obtuvo a partir de una mazorca con síntomas de
moniliasis, aislándose el fitopatógeno en medio Papa Dextrosa Agar preparado con
39 g L⁻¹, esterilizado en autoclave a 121 °C durante 15 min y solidificado en cajas Petri
estériles. Las cajas inoculadas se incubaron a 28 °C durante 22 días y se realizaron
subcultivos para purificar el aislado.
Para cuantificar la inhibición del crecimiento, el mucílago se incorporó al medio Papa
Dextrosa Agar esterilizado una vez enfriado a 45 °C, se inoculó el centro de cada placa
con un disco de 5 mm de micelio fresco y se incubó a 25 °C en oscuridad. El
crecimiento se determinó midiendo el diámetro radial medio a partir de dos diámetros
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perpendiculares y el porcentaje de inhibición se calculó como: % Inhibición =
[(Crecimiento del control − Crecimiento del tratamiento) / Crecimiento del control] ×
100.
La inhibición de esporulación se evaluó adicionando 10 mL de agua destilada estéril
con 0,01 % de Tween 20, desprendiendo el micelio con asa de Drigalsky, filtrando la
suspensión y cuantificando las esporas en cámara de Neubauer bajo microscopio. La
reducción de esporulación se estimó mediante la expresión: % Esporulación =
[(Número de esporas control − Número de esporas tratamiento) / Número de esporas
control] × 100.
El pH del mucílago fermentado se midió a los 5, 10 y 15 días con potenciómetro
calibrado con soluciones tampón de pH 4, 7 y 10, verificándose con tiras indicadoras
y registrándose por triplicado. La biomasa fúngica se determinó disolviendo el medio
de una placa en agua destilada, filtrando con papel Whatman N.º 1, secando el micelio
a 60 °C durante 48 h y pesándolo en balanza de precisión, estimándose el peso seco
por diferencia.
Para analizar el daño de membrana, fragmentos miceliales se cultivaron en 50 mL de
caldo Papa Dextrosa a 25 °C con agitación por 48 h, se filtraron y resuspendieron en
agua destilada estéril con mucílago a 0, 1,25, 2,5, 3,75 y 5,0 μL mL⁻¹. La conductividad
se registró a 0, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 80, 100 y 120 min, determinándose una
conductividad final tras ebullición, y la conductividad relativa se calculó como:
Conductividad eléctrica relativa (%) = (Conductividad eléctrica / Conductividad
eléctrica final) × 100.
La viabilidad celular se evaluó incubando tapones miceliales en caldo Papa Dextrosa,
adicionando mucílago a las mismas concentraciones y tiñendo con 1 μL de azul de
tripano al 0,4 % para observación microscópica, repitiéndose cada ensayo tres veces.
La fuga intracelular se estimó cultivando micelio en 100 mL de caldo Papa Dextrosa
por 48 h a 25 °C, lavando y resuspendiendo en agua estéril con mucílago,
recolectando sobrenadantes a 0, 2, 4, 6, 8, 10 y 12 h y cuantificando liberación de
ADN por absorbancia a 260 nm.
Los datos se sometieron a análisis de varianza para efectos principales e interacción,
verificándose normalidad con Shapiro–Wilk y homogeneidad con Levene. Cuando se
cumplieron los supuestos, la comparación de medias se realizó con Tukey a un nivel
de significancia de 0,05. Adicionalmente, se ajustaron modelos de superficie de
respuesta de segundo orden con la función rsm() en R, se generaron superficies y
contornos, y se efectuó correlación de Pearson representada mediante mapas de
calor jerarquizados, realizándose el procesamiento en RStudio bajo R.
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3. Resultados
3.1. Caracterización morfológica de M. roreri.
Las colonias del fitopatógeno cultivadas en medio PDA a 25 °C mostraron un
desarrollo morfológico progresivo. A los 5 días se observó un micelio filamentoso
inicial de 5–10 mm, blanco lechoso, con manto algodonoso y bordes ligeramente
lobulados, alcanzando 30–35 mm. Entre los días 5 y 10 el micelio se engrosó y el
centro adquirió tonalidades crema a ámbar, con crecimiento de 65–70 mm,
esporulación incipiente y márgenes ondulados definidos. Al día 15 el crecimiento radial
cubrió la placa (90–95 mm), con textura cotonosa aterciopelada, coloración de gris
parduzco a marrón claro, márgenes convexo-ondulados y reverso marrón claro,
evidenciando máxima esporulación y maduración micelial. Estos cambios reflejaron la
transición fisiológica del patógeno hacia estructuras reproductivas en el cultivo (Tabla
1, Figura 1).
Tabla 1
Morfología de M. roreri s observados después de 5, 10 y 15 días de incubación
Aislamiento
Diámetro
(mm)¹
Aspecto de la
superficie
Color
suprayacente
Margen
Color
reverso
Observaciones
adicionales
H805
Moniliohthora
spp.
5,33
Micelio denso,
cotonato,
aterciopelado.
Gris parduzco a
marrón claro
Margen
ondulado,
convexo
Marrón
claro.
Cobertura
completa,
esporulación
máxima.
Nota: Diámetro medido en cajas de Petri (90 mm) a 25 °C sobre medio PDA (Autores, 2026).
La figura 1 muestra las estructuras morfológicas características de M. roreri,
incluyendo la morfología colonial desarrollada en medio de cultivo PDA tras 15 días
de incubación, así como las estructuras reproductivas observadas mediante tinción
con azul de tripano al 0,4 %.
Figura 1
Identificación morfológica de M roreri
Nota: Estructuras morfológicas de M. roreri observados mediante microscopía óptica (barra de escala:
50 µm, aumento 400×). (A y B) Morfología colonial en medio PDA tras 15 días de incubación a
temperatura ambiente (25 °C); (C, D y E) Conidios de M. roreri teñidos con azul de tripano al 0,4 %; (F)
Hifas septadas de M. roreri (Autores, 2026).
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3.2. Identificación molecular y análisis filogenético.
El aislado H805, identificado con un diamante negro, se ubicó dentro del clado de
Moniliophthora roreri con alto soporte estadístico (bootstrap = 99 %), confirmando su
identidad. En la Figura 2 se observa su estrecha relación con secuencias de referencia
de GenBank (DQ222925.1, DQ222923.1, EU047937.1 y OP820440.1), lo que
evidencia afinidad genética consistente. El árbol separó adecuadamente especies del
género como M. purpurea, M. mayarum, M. ticoi, M. brasiliensis y M. perniciosa. Se
utilizó AY317137.1 (Crinipellis brasiliensis) como grupo externo.
Figura 2
Análisis filogenético de cepas del género M. roreri basado en la región ITS
Nota: (Autores, 2026).
3.3. Porcentaje de inhibición.
El tiempo de fermentación del mucílago (factor A) modificó significativamente la
inhibición de M. roreri (p < 0,05). A los 15 días de evaluación, el mucílago fermentado
15 días alcanzó 59,75 %, superando a 10 días (39,45 %) y 5 días (20,75 %), con
diferencias entre tratamientos, y evidenció incrementos consistentes conforme el
mucílago maduró. En la medición inicial a los 5 días, la inhibición fue 39,30 % (15
días), 31,75 % (10 días) y 22,10 % (5 días), siendo este último el menor. Así, la
fermentación prolongada potenció el efecto en general (Figura 3).
Figura 3
Prueba de Tukey para inhibición del fitopatógeno del Factor A
Nota: Letras diferentes evidencian diferencias significativas (P < 0,05) entre tratamientos. ± Desviación
estándar (Autores, 2026).
a
a
a
b
b
b
c
c
c
15
25
35
45
55
65
5 días 10 días 15 días
Inhibición Factor
A: Días de
fermentación (%)
a0: 5 días a1: 10 días a2: 15 días
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Respecto al Factor B: concentración del mucílago, el tratamiento b0 (10 %) alcanzó el
mayor porcentaje de inhibición a los 15 días (67,46 %), seguido por b1 (49,86 %), b2
(38,90 %), b3 (11,33 %) y el control (0,00 %), con diferencias significativas entre cada
concentración (p < 0,05). En la evaluación a los 5 días, el tratamiento control registró
la inhibición más baja (0,00 %), seguido de los tratamientos b0, b1, b2 y b3 con
resultados de 48,13 %; 35,80 %; 25,46 % y 6,80 % respectivamente; confirmando que
la eficacia inhibitoria del mucílago crece de forma dependiente de la concentración
(p < 0,05) (Figura 4).
Figura 4
Prueba de Tukey para inhibición del fitopatógeno del Factor B
Nota: Letras diferentes evidencian diferencias significativas (P < 0,05) entre tratamientos. ± Desviación
estándar (Autores, 2026).
El análisis de interacción entre el tiempo de fermentación (factor A) y la concentración
de mucílago (factor B) mostró diferencias significativas en la inhibición de M. roreri,
confirmando que ambos determinan la actividad antifúngica. La mayor inhibición se
obtuvo con 15 días de fermentación y 10 % de mucílago (a2b0), alcanzando 86,00 %
a los 15 días de evaluación y 77,60 % a los 10 días. En contraste, combinaciones de
5 días y 2,5 % presentaron inhibiciones mínimas, inferiores a 4,00 %, evidenciando la
relevancia conjunta de dosis y fermentación para el biocontrol (Figura 5).
Figura 5
Prueba de Tukey para inhibición del fitopatógeno interacción AxB
Nota: Letras diferentes evidencian diferencias significativas (P < 0,05) entre tratamientos. ± Desviación
estándar (Autores, 2026).
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Se presentan cajas Petri con medio PDA inoculadas con el fitopatógeno y tratadas
con mucílago fermentado en concentraciones de 2,5 %, 5,0 %, 7,5 % y 10 %,
evaluadas a 5, 10 y 15 días de fermentación. El control corresponde al crecimiento sin
mucílago. Se evidenció una inhibición del micelio dependiente de la concentración y
del tiempo, destacándose mayor restricción del crecimiento con fermentaciones de 10
a 15 días y concentraciones intermedias de 5,0 % y 7,5 % (Figura 6).
Figura 6
Evaluación morfológica del efecto in vitro del mucílago de cacao sobre M. roreri.
Nota: Aplicación de mucilago de cacao en μL mL−1 (Autores, 2026).
3.4. Porcentaje de esporulación.
Los resultados obtenidos para esta variable evidencian que la actividad antifúngica del
mucílago de cacao, medida a través del porcentaje de inhibición de la esporulación,
se ve significativamente influenciada por el Factor A: días de fermentación del
mucílago. En la figura 7 se muestra, que el tratamiento con 15 días de fermentación
presentó el mayor porcentaje de inhibición (89,36 %), seguido por los tratamientos de
10 días (83,95 %) y 5 días (78,35 %). De acuerdo con el análisis estadístico, el
tratamiento a los 15 días de fermentación difirió significativamente, lo que indica que
un mayor tiempo de fermentación incrementa la eficacia antifúngica del mucílago
sobre la esporulación del fitopatógeno.
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Figura 7
Efecto del número de días de fermentación del mucílago de cacao (Factor A) sobre la
inhibición de la esporulación de M. roreri, evaluada a los 15 días del experimento
Nota: Letras diferentes evidencian diferencias significativas (P < 0,05) entre tratamientos. ± Desviación
estándar (Autores, 2026).
Como se muestra en la figura 8, el factor B: concentración del mucílago de cacao,
influye significativamente en la inhibición de la esporulación de M. roreri. A los 15 días
de fermentación, se observó un incremento progresivo en el porcentaje de inhibición
conforme aumentó la concentración del mucílago. El tratamiento con 10 % de
mucílago presentó la mayor inhibición esporulativa (89,02 %), con diferencias
estadísticamente significativas frente a los tratamientos con bajas concentraciones.
Esto evidencia que una mayor concentración del mucílago potencia su actividad
antifúngica, especialmente en etapas críticas del ciclo del fitopatógeno como la
esporulación.
Figura 8
Inhibición de la esporulación de M. roreri en función de la concentración del mucílago
de cacao (Factor B), evaluada a los 15 días de fermentación
Nota: Letras diferentes evidencian diferencias significativas (P < 0,05) entre tratamientos. ± Desviación
estándar (Autores, 2026).
Los resultados obtenidos para esta variable evidencian que la actividad antifúngica del
mucílago de cacao se ve significativamente influenciada por el tiempo de fermentación
a
b
c
70
75
80
85
90
95
a0: 5 días a1: 10 días a2: 15 días
Inhibición esporulación factor
A: Días de fermentación (%)
15 días
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y la concentración aplicada. Las combinaciones que presentaron mayor inhibición de
esporulación fueron los tratamientos (a1b0: 10 días + 10 % y a2b0: 15 días + 10 %),
alcanzando niveles altos de inhibición de esporulación, con valores de 89,80 % y
89,60 % respectivamente, figura 9. Los tratamientos con menor concentración del
mucílago con 2,5 % independientemente del tiempo de fermentación (a0b3, a1b3 y
a2b3), presentaron porcentajes bajos de inhibición, con valores cercanos al 3 %.
Figura 9
Porcentaje de inhibición de esporulación de M. roreri
Nota: Letras diferentes evidencian diferencias significativas (P < 0,05) entre tratamientos. ± Desviación
estándar (Autores, 2026).
3.3.1. pH del mucílago a diferentes días de fermentación
Los valores de pH del mucílago de cacao mostraron variaciones significativas en
función del tiempo de fermentación. En la figura 10 se muestra, que, a los 10 días de
fermentación, se registró el valor mayor con un pH de 3,31, lo que indica una ligera
disminución en la acidez en comparación con los otros tratamientos. Por el contrario,
tanto a los 5 como a los 15 días de fermentación, el pH fue menor, con valores de 3,18
y 3,13, respectivamente.
Figura 10
Variación del pH del mucílago del cacao según los días de fermentación
Nota: Letras diferentes evidencian diferencias significativas (P < 0,05) entre tratamientos. ± Desviación
estándar (Autores, 2026).
d d c b
a
e
d c b
a
e
d
c
b
a
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
5 días + 10 %
5 días + 7,5 %
5 días + 5,0 %
5 días + 2,5 %
5 días + Control
10 días + 10 %
10 días + 7,5 %
10 días + 5,0 %
10 días + 2,5 %
10 días + Control
15 días + 10 %
15 días + 7,5 %
15 días + 5,0 %
15 días + 2,5 %
15 días + Control
Inhibición esporulación de
Moniliophthora roreri. (%)
b
a
b
2,90
2,95
3,00
3,05
3,10
3,15
3,20
3,25
3,30
3,35
3,40
a0: 5 días a1: 10 días a2: 15 días
Variación pH mucílago de
cacao
Días de fermentación
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3.3.2. Biomasa fúngica
Como se muestra en la figura 11, los resultados muestran que la biomasa fúngica del
fitopatógeno se vio significativamente influenciada por el factor A: días de
fermentación del mucílago de cacao. Se observó una tendencia decreciente en la
biomasa fúngica conforme aumentaron los días de fermentación, lo que indica un
efecto antifúngico más pronunciado en tratamientos más prolongados. En el
tratamiento 15 días de fermentación se registraron valores inferiores (0,10; 0,09; 0,08),
seguidos por los 10 días (0,15; 0,14; 0,14) y finalmente el tratamiento a los 5 días con
valores superiores (0,17; 0,16; 0,15); estas diferencias entre días son
estadísticamente significativas (p < 0,05), los resultados indican que prolongar la
fermentación del mucílago reduce de manera creciente y significativa la biomasa de
M. roreri.
Figura 11
Efecto del número de días de fermentación del mucílago de cacao (Factor A) sobre la
biomasa fúngica del fitopatógeno.
Nota: Letras diferentes evidencian diferencias significativas (P < 0,05) entre tratamientos. ± Desviación
estándar (Autores, 2026).
Para el factor B: concentración de mucílago, figura 12; se evidenció una disminución
progresiva de la biomasa al aumentar la concentración del mucílago, especialmente
en los tratamientos con 7,5 % y 10 % de concentración del mucílago. El experimento
a los 5, 10 y 15 días, con una concentración de 10 % de mucílago se observaron
resultados inferiores de biomasa fúngica (0,09; 0,08; y 0,07 respectivamente);
mientras que el tratamiento control sin mucílago registró valores de biomasa
superiores (0,20; 0,19 y 0,17). Esto confirma que a mayor concentración de mucílago
corresponde una reducción progresiva y consistente de la biomasa del fitopatógeno.
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Figura 12
Efecto de la concentración del mucílago (Factor B) sobre la biomasa fúngica del
fitopatógeno
Nota: Letras diferentes evidencian diferencias significativas (P < 0,05) entre tratamientos. ± Desviación
estándar (Autores, 2026).
Los resultados, presentados en la figura 13, evidencian que la biomasa fúngica del
fitopatógeno presentó variaciones significativas en función de los tratamientos
evaluados. Se observó que los valores inferiores de biomasa fúngica se registraron
en el tratamiento correspondiente a 15 días de fermentación y 10 % de concentración
de mucílago (a2b0), con un valor promedio de 0,002 g, evidenciando una marcada
inhibición del crecimiento fúngico en comparación con los demás tratamientos. De
forma similar, el tratamiento a 15 días de fermentación con 7,5 % de concentración
(a2b1) también presentó una baja biomasa (0,03 g), siendo estadísticamente diferente
de la mayoría de los tratamientos con 5 y 10 días de fermentación. Por el contrario,
los tratamientos con 5 y 10 días de fermentación, en combinación con concentraciones
bajas entre 2,5 % y 0 % de mucílago, registraron las biomasas fúngicas más elevadas,
alcanzando hasta 0,19 g en el tratamiento con 10 días de fermentación y 0 % de
mucílago.
Estos resultados indican que tanto el tiempo de fermentación del mucílago como su
concentración tienen un efecto significativo en la reducción del crecimiento de M.
roreri, siendo los tratamientos con mayor tiempo de fermentación y concentración de
mucílago los más efectivos en inhibir su desarrollo.
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Figura 13
Evaluación de la biomasa fúngica del fitopatógeno.
Nota: Letras diferentes evidencian diferencias significativas (P < 0,05). ± Desviación estándar (Autores,
2026).
3.3.3. Absorbancia de conductividad eléctrica
En la figura 14, se muestran los resultados de la conductividad eléctrica, los cuales
evidenciaron un aumento progresivo en función al Factor A: días de fermentación del
mucílago, reflejando una mayor liberación de compuestos iónicos en el medio. El
tratamiento con 15 días de fermentación se observó con valores altos en todos los
tiempos de medición, iniciando con un valor de 80,18 % y alcanzando un máximo de
86,11 % al final del periodo. Le siguió el tratamiento con 10 días de fermentación, con
valores entre 74,12 % y 78,72 %, mientras que el tratamiento con 5 días registró
valores bajos, desde 65,57 % hasta 72,13 %.
Este patrón indica que la fermentación más prolongada favorece una mayor
acumulación de metabolitos solubles, como ácidos orgánicos, péptidos y sales, que
contribuyen al aumento de la conductividad. Por lo tanto, la conductividad eléctrica se
presenta como un indicador fiable del avance del proceso fermentativo y está asociada
con el incremento en la actividad antifúngica observada en los tratamientos con mayor
tiempo de fermentación.
d
c
b
b
a
e
d
b
b
a
f
e
d
c
b
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
5 días + 10 %
5 días + 7,5 %
5 días + 5,0 %
5 días + 2,5 %
5 días + Control
10 días + 10 %
10 días + 7,5 %
10 días + 5,0 %
10 días + 2,5 %
10 días + Control
15 días + 10 %
15 días + 7,5 %
15 días + 5,0 %
15 días + 2,5 %
15 días + Control
Biomasa fúngica
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Figura 14
Efecto de los días de fermentación de mucílago de cacao (Factor A) sobre la
conductividad relativa de M. roreri durante 120 min de incubación
Nota: Letras diferentes evidencian diferencias significativas (P < 0,05). ± Desviación estándar (Autores,
2026).
En la Figura 15 se evidencian diferencias estadísticamente significativas (p < 0,05)
entre las concentraciones de mucílago evaluadas en relación con el crecimiento de M.
roreri. A lo largo del periodo de evaluación, el tratamiento con 10 % de mucílago
registró el mayor crecimiento micelial, seguido por las concentraciones de 7,5 %, 5 %
y 2,5 %. El tratamiento control sin mucílago presentó consistentemente valores bajos
en todos los tiempos de medición. Cada tratamiento mostró diferencias significativas
respecto al siguiente en orden creciente. Este comportamiento evidencia un efecto
dependiente de la dosis sobre la permeabilidad del micelio y respalda la acción
antifúngica del mucílago fermentado.
Figura 15
Efecto de la concentración de mucílago de cacao (Factor B) sobre la conductividad
relativa de M. roreri durante 120 min de incubación
Nota: Letras diferentes evidencian diferencias significativas (P < 0,05). ± Desviación estándar (Autores,
2026).
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Los resultados de la interacción evidencian diferencias estadísticamente significativas
con un nivel de confianza (p < 0,05) entre los tratamientos combinados de tiempo de
fermentación y concentración de mucílago aplicado durante el ensayo in vitro, como
se muestra en la figura 16. A lo largo del periodo de evaluación, el tratamiento con 15
días de fermentación y 10 % de mucílago demostró consistentemente valores altos de
conductividad eléctrica, alcanzando un 94,00 % a las 120 min y manteniéndose dentro
del grupo estadísticamente superior desde las primeras mediciones. Este tratamiento
superó significativamente a la mayoría de las combinaciones evaluadas.
En efectividad le siguieron los tratamientos con 7,5 % de mucílago fermentado durante
10 y 5 días, ambos alcanzando un 91,00 % de conductividad eléctrica, reforzando la
importancia tanto del volumen aplicado como del tiempo de fermentación. Por otro
lado, los valores más bajos de conductividad eléctrica se observaron en el tratamiento
sin mucílago y aquellos con concentraciones bajas, entre 2,5 % y 5 %, particularmente
cuando se combinaron con 15 días de fermentación. En este grupo, el tratamiento con
5 días y 7,5 % alcanzó solo un 59,00 %, valor estadísticamente inferior al resto de
tratamientos. Estos resultados indican que, aunque el tiempo de fermentación es un
factor clave, una concentración de mucilago insuficiente limita significativamente el
incremento en la conductividad eléctrica asociado con la liberación de metabolitos
iónicos y compuestos solubles generados durante el proceso fermentativo.
Figura 16
Efecto del mucílago de cacao sobre la permeabilidad de la membrana plasmática de
M. roreri evaluado durante 120 min mediante conductividad eléctrica relativa
Nota: Letras diferentes evidencian diferencias significativas (P < 0,05). ± Desviación estándar (Autores,
2026).
Estos resultados se complementan con la observación mediante tinción con azul de
tripano al 4 %, donde la colonia del fitopatógeno expuesta a concentraciones altas de
mucílago (3,75 y 5,0 μL mL⁻¹) y fermentación intermedia (5 y 10 días) mostraron una
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mayor proporción de células teñidas, indicativo de daño y muerte celular; mientras
que, el tratamiento control presentó un número mínimo de células teñidas,
confirmando la correlación entre la conductividad eléctrica y la pérdida de viabilidad
celular.
4. Discusión
La caracterización morfológica del fitopatógeno en medio PDA evidencia un patrón
colonial compatible con M. roreri, con micelio algodonoso, progresión de coloración y
alta esporulación hacia los 15 días, lo que coincide con descripciones taxonómicas
reportadas para aislamientos asociados a moniliasis bajo condiciones controladas
(García, 2021). La transición de blanco lechoso a tonalidades gris parduzco y marrón
claro sugiere un proceso de maduración micelial y diferenciación reproductiva,
consistente con la biología del patógeno. Este comportamiento resulta relevante
porque establece un punto de partida confiable para interpretar los bioensayos: el
aislamiento expresa rasgos morfológicos esperables del agente causal y, por tanto, la
respuesta al mucílago puede discutirse con mayor validez. En esa misma línea, los
cambios estructurales observados en tratamientos sometidos a estrés se interpretan
como respuestas adaptativas que, aunque pueden fortalecer la pared celular, tienden
a comprometer la tasa de crecimiento y la acumulación de biomasa, como se ha
descrito para fitopatógenos expuestos a condiciones químicas desfavorables (Pérez-
Bustamante y López, 2022).
La identificación molecular y el análisis filogenético confirmaron la identidad del
aislado y fortalecieron la validez experimental del estudio, al sustentar la asignación
taxonómica mediante marcadores moleculares y soporte estadístico en el
agrupamiento, lo que es coherente con criterios empleados para Moniliophthora y
reduce el riesgo de sesgos por contaminación o asignación errónea en hongos
filamentosos (Aime & Phillips-Mora, 2005; Vélez et al., 2023). Asimismo, la afinidad
con secuencias de referencia y la separación respecto a especies cercanas aporta
consistencia biológica al material evaluado, aspecto relevante al considerar que la
variabilidad genética puede relacionarse con diferencias en comportamiento y
respuesta a medidas de manejo (Rojas et al., 2021; Barsottini et al., 2023).
En cuanto al desempeño antifúngico, la inhibición del crecimiento micelial mostró un
patrón dependiente del tiempo de fermentación y de la concentración del mucílago,
con incrementos consistentes cuando ambos factores se optimizan. Este
comportamiento se alinea con la evidencia de que la fermentación transforma matrices
vegetales y potencia su bioactividad al modificar el perfil químico y la disponibilidad de
compuestos con potencial antimicrobiano, particularmente fracciones fenólicas y
metabolitos orgánicos derivados del proceso fermentativo (Calvo et al., 2021; Yang et
al., 2023). En este marco, la mayor eficacia obtenida en fermentaciones prolongadas
es consistente con estudios que atribuyen el aumento de la actividad biológica a
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cambios metabólicos inducidos durante la fermentación y a la acumulación de
compuestos funcionales en la matriz fermentada (Wang et al., 2022).
De forma complementaria, el efecto dosis-dependiente observado concuerda con el
planteamiento de que concentraciones bajas pueden no alcanzar niveles efectivos de
compuestos activos para ejercer inhibición marcada, fenómeno descrito para
antimicrobianos naturales en sistemas complejos (Tiwari et al., 2009). Desde una
perspectiva aplicada, la interacción entre fermentación y concentración adquiere
relevancia porque permite identificar combinaciones con mayor eficiencia inhibitoria,
contribuyendo a criterios técnicos para una eventual estandarización del bioproducto.
La reducción de la esporulación observada en los tratamientos más efectivos aporta
un componente epidemiológico clave, ya que limitar la producción de propágulos
puede disminuir el potencial de dispersión del patógeno. Se ha descrito que
compuestos fenólicos y ácidos orgánicos interfieren con procesos de señalización y
diferenciación asociados a estructuras reproductivas, afectando la capacidad de
reproducción además del crecimiento vegetativo (Yan et al., 2023). En el caso de M.
roreri, este efecto resulta especialmente pertinente porque complementa la inhibición
micelial con una disminución del potencial de propagación, lo que refuerza el valor del
mucílago fermentado como alternativa de control biológico.
La disminución de biomasa fúngica respalda que el efecto del mucílago fermentado
no se limita a restringir la expansión radial, sino que compromete la acumulación de
masa micelial, lo cual sugiere una afectación fisiológica más profunda. En estudios
con compuestos bioactivos vegetales se han reportado reducciones de biomasa
asociadas a alteraciones de permeabilidad celular y afectación de procesos
biosintéticos esenciales, lo que resulta coherente con la respuesta observada bajo las
condiciones de mayor eficacia (Li et al., 2022). Además, al comparar de manera
conceptual con estrategias biológicas y químicas utilizadas en el manejo de patógenos
del cacao, el mucílago fermentado podría considerarse un componente
complementario dentro de enfoques integrados que buscan reducir la dependencia
exclusiva de medidas sintéticas (Guato Molina et al., 2019; Bateman et al., 2005).
Los ensayos asociados a integridad de membrana sostienen un mecanismo
consistente con daño celular, ya que el aumento de conductividad y la liberación de
componentes intracelulares reflejan pérdida de homeostasis y fuga de solutos. Este
patrón ha sido descrito cuando compuestos fenólicos o mezclas bioactivas
desestabilizan la membrana plasmática y provocan permeabilización, con efectos
directos sobre viabilidad y desempeño del microorganismo (He et al., 2018; Takó et
al., 2020).
La fermentación puede intensificar este efecto al potenciar fracciones activas de la
matriz y favorecer un perfil bioactivo con mayor capacidad antimicrobiana, lo cual es
coherente con revisiones que describen mecanismos basados en permeabilización y
estrés asociado a metabolitos bioactivos (Angane et al., 2022). En conjunto, los
hallazgos sostienen que el mucílago de cacao fermentado presenta potencial como
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alternativa biológica con efecto dependiente de fermentación y concentración; sin
embargo, su proyección requiere validaciones posteriores fuera del entorno de
laboratorio, así como una caracterización química que permita vincular con precisión
el perfil de metabolitos con la magnitud del efecto observado.
5. Conclusiones
En condiciones de laboratorio, el mucílago de cacao fermentado mostró capacidad
antifúngica frente a Moniliophthora roreri, y su eficacia dependió del tiempo de
fermentación y de la concentración aplicada. La fermentación de 10 y 15 días
incrementó la inhibición del crecimiento micelial, y la combinación de 15 días con 10
% alcanzó 86,00 % de inhibición a los 15 días de evaluación. Los ensayos de
integridad de membrana respaldaron este efecto, con aumento de la conductividad
relativa hasta 94 % y liberación de compuestos intracelulares (absorbancia 0,88 a 256
nm), lo que sugiere permeabilización celular como mecanismo predominante. En
conjunto, los resultados sustentan el potencial del mucílago como insumo de bajo
impacto para estrategias sostenibles de manejo de la moniliasis, siempre que se
estandaricen fermentación y dosificación. Se recomienda validar su desempeño en
campo en diferentes épocas y localidades, evaluar estabilidad y caracterizar su
composición para asociar metabolitos con eficacia.
CONFLICTO DE INTERESES
“Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses”.
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